Elisa實驗：ELISA試劑盒應(yīng)用及實驗前的準備

　　ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

　　ELISA試劑盒試劑特點——Elisa試驗敏感性高，特異性強，重復(fù)性好。

　　ELISA試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素。

　　ELISA試劑盒ELISA原理——ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

　　ELISA試劑盒檢測前準備工作：

　　1. 仔細閱讀說明書，確定試劑盒在有效期內(nèi)。

　　2. 按說明書確定所有試劑是否齊全，完整的滬鼎ELISA試劑盒包含30倍濃縮洗滌液, 酶標試劑,酶標包被板,樣品稀釋液,顯色劑A液,顯色劑B液,終止液,標準品,標準品稀釋液,說明書,封板膜,密封袋等12個組成部分。另外要確認試劑盒以外的材料是否齊全，如酶標儀、移液器及吸頭、加樣槽、蒸餾水或去離子水、洗瓶或者自動洗板機、37°C水浴鍋或恒溫箱、EP管、稀釋用聚丙烯試管、無粉一次性乳膠手套等。

　　3. 實驗前，將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置半個小時，以讓試劑恢復(fù)到室溫。

　　4. 將10×的檢測緩沖液(Assay Buffer)稀釋到1×，吸取10X濃縮Assay buffer 5mL至50mL離心管，加蒸餾水至 50Ml，震蕩混勻備用。1×Assay buffer主要用于檢測抗體、HRP等濃縮液的稀釋。

　　5. 將20×的洗滌液稀釋到1×，吸取20X洗液50mL至1L量筒，加蒸餾水至1000Ml，混勻，轉(zhuǎn)移至干凈容器內(nèi)備用，洗滌液用于實驗中的洗滌步驟。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用37℃水浴微加熱使結(jié)晶wan全溶解后再配制洗滌液，(加熱溫度不要超過50℃)使用時洗滌液應(yīng)為室溫。

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